Molekulární biologie -Molecular biology

z Wikipedie, otevřené encyklopedie

Molekulární biologie / m ə ˈ l ɛ k j ʊ l ər / je odvětví biologie, které se snaží porozumět molekulárnímu základu biologické aktivity v buňkách a mezi nimi, včetně molekulární syntézy, modifikace, mechanismů a interakcí. Studium chemické a fyzikální struktury biologických makromolekul je známé jako molekulární biologie.

Molekulární biologie byla poprvé popsána jako přístup zaměřený na základy biologických jevů – odhalování struktur biologických molekul i jejich interakcí a toho, jak tyto interakce vysvětlují pozorování klasické biologie.

V roce 1945 termín molekulární biologie použil fyzik William Astbury. Vývoj v oblasti molekulární biologie nastal velmi pozdě, protože se pochopilo, že složitý systém nebo výhodný přístup by byl vytvořen jednoduchým způsobem pochopení pomocí bakterií a bakteriofágů, tento organismus poskytuje informace o základních biologických procesech snadněji než živočišná buňka. V roce 1953 pak dva mladí muži jménem Francis Crick a James Watson pracující v jednotce Medical Research Council, Cavendishově laboratoři v Cambridge (nyní MRC Laboratory of Molecular Biology ), vytvořili model dvojité šroubovice DNA, který změnil celý scénář výzkumu a navrhli DNA. struktura založená na předchozím výzkumu Rosalind Franklin a Maurice Wilkins, pak výzkum vedl k nalezení materiálu DNA v jiných mikroorganismech, rostlinách a zvířatech.

Molekulární biologie není pouze studiem biologických molekul a jejich interakcí; spíše je to také soubor technik vyvinutých od geneze pole, které vědcům umožnily dozvědět se o molekulárních procesech. Jednou z pozoruhodných technik, která způsobila revoluci v oboru, je polymerázová řetězová reakce (PCR), která byla vyvinuta v roce 1983. PCR je reakce, která amplifikuje malá množství DNA a používá se v mnoha aplikacích napříč vědeckými disciplínami, jak bude diskutováno později. .

Ústřední dogma molekulární biologie popisuje proces, při kterém se DNA přepisuje na RNA, která je pak přeložena na protein.

Molekulární biologie také hraje kritickou roli v porozumění strukturám, funkcím a vnitřním kontrolám v jednotlivých buňkách, které lze použít k účinnému zacílení nových léků, diagnostice onemocnění a lepšímu pochopení buněčné fyziologie. Některé klinické výzkumy a lékařské terapie vyplývající z molekulární biologieou zahrnuty do genové terapie, zatímco použití molekulární biologie nebo molekulární buněčné biologie v medicíně je nyní označováno jako molekulární medicína .

Historie molekulární biologie

Molekulární biologie leží na průsečíku biochemie a genetiky; jak se tyto vědecké disciplíny objevovaly a vyvíjely ve 20. století, bylo jasné, že se obě snažily určit molekulární mechanismy, kteréou základem životně důležitých buněčných funkcí. Pokrok v molekulární biologii úzce souvisel s vývojem nových technologií a jejich optimalizací. Molekulární biologie byla objasněna prací mnoha vědců, a tak historie oboru závisí na pochopení těchto vědců a jejich experimentů.

Všechno to začíná fenoménem transformace v bakteriích, v roce 1928 Frederick Griffith pozoroval fenomén transformace z jedné bakterie na druhou [nyní známý jako genetická transformace]. V té době nedokázal vysvětlit fenomén transformace. Později v roce 1944 tři vědci Oswald Avery, Colin Macleod a Maclyn McCarty demonstrovali celý fenomén transformace bakterií. Po dvou letech v roce 1930 byla molekulární biologie ustanovena jako oficiální vědní obor. Ale termín „molekulární biologie“ byl vytvořen až v roce 1938 a udělal to vědec Warren Weaver, který pracoval jako ředitel přírodních věd v Rockefellerově nadaci.

Z následujícího experimentu vyplynulo, že DNA je základní genetický materiál, který způsobil genetické změny. Základní složení DNA bylo známo, že obsahuje čtyři báze známé jako – Adenin, Guanin, Thymin a Cytosin. Takže na základě chemického složení a rentgenové krystalografie, kterou provedli Maurice Wilkins a Rosalind Franklin, struktura DNA byla navržena Jamesem Watsonem a Francisem Crickem. Než však Watson a Crick navrhli strukturu DNA, v roce 1950 rakouský vědec Erwin Chargaff navrhl teorii / pravidlo [dnes známé jako Chargaffovo pravidlo], které uvádělo, že počet adeninu a thyminu a guaninu a cytosinu je stejný. poměr.

Chargaffovo pravidlo

„Chargaffovo pravidlo uvádělo, že DNA z jakéhokoli druhu jakéhokoli organismu by měla mít stechiometrický poměr 1:1 purinu a pyrimidinů (tj. A+G=T+C) a konkrétněji, že množství guaninu by se mělo rovnat cytosinu . a množství adeninu by se mělo rovnat thyminu . Tento vzorec se nachází v obou řetězcích DNA“.

Pole genetiky vzniklo jako pokus pochopit molekulární mechanismy genetické dědičnosti a strukturu genu . Průkopníkem této práce byl Gregor Mendel v roce 1866, kdy poprvé napsal zákony genetické dědičnosti na základě svých studií páření křížení u rostlin hrachu. Jedním takovým zákonem genetické dědičnosti je zákon segregace, který říká, že diploidní jedinci se dvěma alelami pro určitý gen předají jednu z těchto alel svému potomstvu. Kvůli jeho kritické práci je studium genetické dědičnosti běžně označováno jako mendelovská genetika .

Velkým milníkem v molekulární biologii byl objev struktury DNA. Tato práce začala v roce 1869 Friedrichem Miescherem, švýcarským biochemikem, který jako první navrhl strukturu zvanou nuklein, o které nyní víme, že jde o deoxyribonukleovou kyselinu neboli DNA. Tuto jedinečnou látku objevil studiem složek obvazů naplněných hnisem a všímal si jedinečných vlastností „látek obsahujících fosfor“. Dalším významným přispěvatelem k modelu DNA byl Phoebus Levene, který navrhl „polynukleotidový model“ DNA v roce 1919 jako výsledek svých biochemických experimentů na kvasinkách. V roce 1950 Erwin Chargaff rozšířil práci Levene a objasnil několik kritických vlastností nukleových kyselin: za prvé, sekvence nukleových kyselin se u různých druhů liší. Za druhé, celková koncentrace purinů (adenin a guanin) se vždy rovná celkové koncentraci pyrimidinů (cystein a thymin). Toto je nyní známé jako Chargaffovo pravidlo. V roce 1953 publikovali James Watson a Francis Crick dvoušroubovicovou strukturu DNA pomocí rentgenové krystalografie, kterou provedli Rosalind Franklin a Maurice Wilkins . Watson a Crick popsali strukturu DNA a uvažovali o důsledcích této jedinečné struktury pro možné mechanismy replikace DNA.

JD Watson a FHC Crick získali v roce 1962 spolu s Mauricem Wilkensem Nobelovu cenu za návrh modelu struktury DNA.

Postupem času objevili v roce 1964 KA Marcker a Frederick Sanger v E.coli zvláštní amioacyl-tRNA, nazvanou N-formyl-methionyl – tRNA a vysvětlili, že tato molekula hraje roli ve speciálním mechanismu prodlužování řetězce. Získal druhou Nobelovu cenu za objev kompletní sekvence 5400 nukleotidů jednovláknové DNA bakteriofágů F´174.

V roce 1961 bylo prokázáno, že když gen kóduje protein, tři po sobě jdoucí báze genové DNA specifikují každou následnou aminokyselinu proteinu. Genetický kód je tedy kód tripletu, kde každý triplet (nazývaný kodon) specifikuje konkrétní aminokyselinu. Dále bylo ukázáno, že kodony se navzájem nepřekrývají v sekvenci DNA kódující protein a že každá sekvence je čtena z pevného výchozího bodu.

Během let 1962–1964 se díky použití podmíněně letálních mutantů bakteriálního viru dosáhlo zásadního pokroku v našem chápání funkcí a interakcí proteinů používaných v mechanismu replikace DNA, opravy DNA, rekombinace DNA a při sestavování. molekulárních struktur.

Schématické znázornění Watsonovy a Crickovy struktury DNA
Popis úhlu ve struktuře DNA

Experiment F. Griffitha

Schématické znázornění experimentu

V roce 1928 se Fredrick Griffith setkal s virulentní vlastností bakterií pneumokoka, která zabíjela laboratorní krysy. Podle Mendela, který v té době převládal, mohl přenos genů probíhat pouze z rodičovských do dceřiných buněk. Griffith předložil další teorii a uvedl, že přenos genů, ke kterému dochází u příslušníků stejné generace, je známý jako horizontální přenos genů (HGT). Tento jev se dnes nazývá genetická transformace.

Griffith se zabýval bakterií Streptococcus pneumoniae, která měla dva různé kmeny, jeden virulentní a hladký a jeden avirulentní a drsný. Hladký kmen měl třpytivý vzhled díky přítomnosti typu specifického polysacharidu – polymeru kapsle glukózy a kyseliny glukuronové. Kvůli této polysacharidové vrstvě bakterií imunitní systém hostitele nedokáže rozpoznat bakterie a hostitele zabije. Druhý, avirulentní, drsný kmen postrádá tuto polysacharidovou kapsli a má matný, drsný vzhled.

Je známo, že přítomnost nebo nepřítomnost pouzdra v kmeni je geneticky podmíněna. Hladké a drsné deformace se vyskytují v několika různých typech, jakoou SI, S-II, S-III atd. a RI, R-II, R-III atd. v daném pořadí. Všechny tyto podtypy bakterií S a R se navzájem liší typem antigenu, který produkují.

Experiment Hershey a Chase

Experiment Hershey a Chase

Potvrzení, že DNA je genetický materiál, který je příčinou infekce, pochází z experimentu Hershey a Chase. K experimentu použili E.coli a bakteriofág. Tento experiment je také známý jako experiment s mixérem, protože kuchyňský mixér byl používán jako hlavní zařízení. Alfred Hershey a Martha Chase prokázali, že DNA vstříknutá fágovou částicí do bakterie obsahuje všechny informace potřebné k syntéze fágových částic. Použili radioaktivitu k označení proteinového obalu bakteriofága radioaktivní sírou a DNA radioaktivním fosforem do dvou různých zkumavek. Po smíchání bakteriofága a E.coli do zkumavky začíná inkubační doba, ve které fág transformuje genetický materiál v buňkách E.coli . Poté se směs promíchá nebo protřepe, čímž se oddělí fág od buněk E. coli . Celá směs se odstředí a peleta, která obsahuje buňky E. coli, se zkontroluje a supernatant se odstraní. Buňky E. coli vykazovaly radioaktivní fosfor, což indikovalo, že transformovaným materiálem byla DNA, nikoli proteinový obal.

Transformovaná DNA se připojí k DNA E. coli a radioaktivita je vidět pouze na DNA bakteriofága. Tato mutovaná DNA může být předána další generaci a vznikla teorie transdukce. Transdukce je proces, při kterém bakteriální DNA nese fragment bakteriofágů a předává jej další generaci. Jedná se také o typ horizontálního přenosu genů.

Moderní molekulární biologie

Jak se blíží polovina 20. let, molekulární biologie vstupuje do zlatého věku definovaného vertikálním i horizontálním technickým rozvojem. Vertikálně nové technologie umožňují monitorování biologických procesů na atomové úrovni v reálném čase. Molekulární biologové mají dnes přístup ke stále dostupnějším sekvenačním datům ve stále větších hloubkách, což usnadňuje vývoj nových metod genetické manipulace v nových nemodelových organismech. Podobně budou syntetickí molekulární biologové řídit průmyslovou produkci malých a makromolekul prostřednictvím zavedení exogenních metabolických drah v různých prokaryotických a eukaryotických buněčných liniích.

Horizontálně se sekvenační data stávají dostupnější a využívají se v mnoha různých vědeckých oborech. To podpoří rozvoj průmyslových odvětví v rozvojových zemích a zvýší dostupnost pro jednotlivé výzkumné pracovníky. Podobně lze experimenty s úpravou genu CRISPR-Cas9 nyní vymyslet a implementovat jednotlivci za méně než 10 000 USD v nových organismech, což bude řídit vývoj průmyslových a lékařských aplikací.

Vztah k jiným biologickým vědám

Schematický vztah mezi biochemií, genetikou a molekulární biologií

Následující seznam popisuje pohled na interdisciplinární vztahy mezi molekulární biologií a dalšími souvisejícími obory.

Zatímco výzkumníci praktikují techniky specifické pro molekulární biologii, je běžné je kombinovat s metodami z genetiky a biochemie . Velká část molekulární biologie je kvantitativní a v poslední době bylo provedeno značné množství práce pomocí technik počítačové vědy, jako je bioinformatika a výpočetní biologie . Molekulární genetika, studium struktury a funkce genů, patří mezi nejvýznamnější dílčí oblasti molekulární biologie od počátku 21. století. Ostatní obory biologieou informovány molekulární biologií, buď přímo studiem interakcí molekul samy o sobě, jako v buněčné biologii a vývojové biologii, nebo nepřímo, kde se molekulární techniky používají k odvození historických atributů populací nebo druhů, jako např. obory evoluční biologie, jako je populační genetika a fylogenetika . Existuje také dlouhá tradice studia biomolekul „od základu“, nebo molekulárně, v biofyzice .

Techniky molekulární biologie

animace DNA

Molekulární klonování

Transdukční obrázek

Molekulární klonování se používá k izolaci a potom přenosu požadované sekvence DNA do plazmidového vektoru. Tato technologie rekombinantní DNA byla poprvé vyvinuta v 60. letech minulého století. V této technice je sekvence DNA kódující požadovaný protein klonována pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR) a/nebo restrikčních enzymů do plazmidu ( expresní vektor ). Plasmidový vektor má obvykle alespoň 3 charakteristické rysy: počátek replikace, vícenásobné klonovací místo (MCS) a selektivní marker (obvykle rezistence na antibiotika ). Navíc, upstream od MCSou promotorové oblasti a místo startu transkripce, které regulují expresi klonovaného genu.

Tento plazmid může být vložen do bakteriálních nebo zvířecích buněk. Zavedení DNA do bakteriálních buněk lze provést transformací prostřednictvím příjmu nahé DNA, konjugací prostřednictvím kontaktu buňka-buňka nebo transdukcí prostřednictvím virového vektoru. Zavedení DNA do eukaryotických buněk, jakoou zvířecí buňky, fyzikálními nebo chemickými prostředky, se nazývá transfekce . K dispozici je několik různých technik transfekce, jako je transfekce fosforečnanem vápenatým, elektroporace, mikroinjekce a transfekce liposomy . Plazmid může být integrován do genomu, což vede ke stabilní transfekci, nebo může zůstat nezávislý na genomu a exprimován dočasně, což se nazývá přechodná transfekce.

DNA kódující protein zájmu je nyní uvnitř buňky a protein lze nyní exprimovat. K dispozici je řada systémů, jakoou indukovatelné promotory a specifické buněčné signalizační faktory, které pomáhají exprimovat zájmový protein ve vysokých hladinách. Velká množství proteinu pak mohou být extrahována z bakteriální nebo eukaryotické buňky. Protein může být testován na enzymatickou aktivitu za různých situací, protein může být krystalizován, takže může být studována jeho terciární struktura, nebo ve farmaceutickém průmyslu může být studována aktivita nových léků proti proteinu.

Polymerázová řetězová reakce

Polymerázová řetězová reakce (PCR) je extrémně univerzální technika pro kopírování DNA. Stručně řečeno, PCR umožňuje zkopírovat nebo upravit specifickou sekvenci DNA předem určenými způsoby. Reakce je extrémně silná a za dokonalých podmínek by mohla amplifikovat jednu molekulu DNA na 1,07 miliardy molekul za méně než dvě hodiny. PCR má mnoho aplikací, včetně studia genové exprese, detekce patogenních mikroorganismů, detekce genetických mutací a zavedení mutací do DNA. Technika PCR může být použita k zavedení míst pro restrikční enzymy na konce molekul DNA nebo k mutaci konkrétních bází DNA, což je metoda označovaná jako místně řízená mutageneze . PCR lze také použít k určení, zda se konkrétní fragment DNA nachází v knihovně cDNA . PCR má mnoho variací, jako je reverzní transkripční PCR ( RT-PCR ) pro amplifikaci RNA a v poslední době kvantitativní PCR, které umožňují kvantitativní měření molekul DNA nebo RNA.

Dvouprocentní agarózový gel v borátovém pufru nalijte do gelové misky.

Gelová elektroforéza

SDS-PAGE

Gelová elektroforéza je technika, která odděluje molekuly podle jejich velikosti pomocí agarózového nebo polyakrylamidového gelu. Tato technika je jedním z hlavních nástrojů molekulární biologie. Základním principem je, že fragmenty DNA lze oddělit aplikací elektrického proudu přes gel – protože kostra DNA obsahuje záporně nabité fosfátové skupiny, bude DNA migrovat přes agarózový gel směrem ke kladnému konci proudu. Proteiny lze také separovat na základě velikosti pomocí SDS-PAGE gelu nebo na základě velikosti a jejich elektrického náboje pomocí takzvané 2D gelové elektroforézy .

Proteiny barvené na PAGE gelu pomocí barviva Coomassie blue.

Bradfordský test

Bradford Assay je technika molekulární biologie, která umožňuje rychlou a přesnou kvantifikaci proteinových molekul s využitím jedinečných vlastností barviva zvaného Coomassie Brilliant Blue G-250. Coomassie Blue prochází viditelným barevným posunem z červenohnědé na jasně modrou po navázání na protein. Ve svém nestabilním kationtovém stavu má Coomassie Blue vlnovou délku pozadí 465 nm a vydává červenohnědou barvu. Když se Coomassie Blue naváže na protein v kyselém roztoku, vlnová délka pozadí se posune na 595 nm a barvivo vydá jasně modrou barvu. Proteiny v testu vážou modř Coomassie za asi 2 minuty a komplex protein-barvivo je stabilní asi hodinu, i když se doporučuje, aby se hodnoty absorbance odečítaly do 5 až 20 minut od zahájení reakce. Koncentraci proteinu v Bradfordově testu lze poté měřit pomocí spektrofotometru ve viditelném světle, a proto nevyžaduje rozsáhlé vybavení.

Tato metoda byla vyvinuta v roce 1975 Marion M. Bradfordovou a umožnila výrazně rychlejší a přesnější kvantifikaci proteinů ve srovnání s předchozími metodami: Lowryho postupem a biuretovým testem. Na rozdíl od předchozích metod není Bradfordův test citlivý na interferenci několika neproteinových molekul, včetně ethanolu, chloridu sodného a chloridu hořečnatého. Je však náchylný k ovlivnění silnými alkalickými pufrovacími činidly, jako je dodecylsulfát sodný (SDS).

Makromolekulové blotování a sondování

Termíny Northern, Western a eastern blottingou odvozeny z toho, co původně byl vtip z molekulární biologie, který si hrál s termínem Southern blotting, po technice popsané Edwinem Southernem pro hybridizaci blotované DNA. Patricia Thomas, vývojářka RNA blotu, který se pak stal známým jako Northern blot, ve skutečnosti tento termín nepoužila.

Southern blotting

Southern blot, pojmenovaný po svém vynálezci, biologovi Edwinu Southernovi, je metoda pro sondování přítomnosti specifické sekvence DNA ve vzorku DNA. Vzorky DNA před nebo po štěpení restrikčním enzymem (restrikční endonukleázou)ou separovány gelovou elektroforézou a poté přeneseny na membránu blotováním prostřednictvím kapilárního působení . Membrána je pak vystavena značené DNA sondě, která má sekvenci bází komplementu k sekvenci na DNA, která je středem zájmu. Southern blotting je méně běžně používaný v laboratorní vědě kvůli schopnosti jiných technik, takový jako PCR, detekovat specifické sekvence DNA ze vzorků DNA. Tyto bloty se však stále používají pro některé aplikace, jako je měření počtu kopií transgenu u transgenních myší nebo při konstrukci genových knockout linií embryonálních kmenových buněk .

Northern blotting

Northern blot diagram

Northern blot se používá ke studiu přítomnosti specifických molekul RNA jako relativní srovnání mezi sadou různých vzorků RNA. Je to v podstatě kombinace denaturační RNA gelové elektroforézy a blotu . V tomto procesu je RNA separována na základě velikosti a poté je přenesena na membránu, která je poté sondována značeným komplementem požadované sekvence. Výsledky lze vizualizovat různými způsoby v závislosti na použitém štítku; většina však vede k odhalení pásů reprezentujících velikosti RNA detekované ve vzorku. Intenzita těchto pásů souvisí s množstvím cílové RNA v analyzovaných vzorcích. Tento postup se běžně používá ke studiu, kdy a kolik genové exprese dochází, měřením toho, kolik této RNA je přítomno v různých vzorcích, za předpokladu, že nedochází k žádné post-transkripční regulaci a že hladiny mRNA odrážejí proporcionální hladiny odpovídajícího proteinu. vyrobeno. Je to jeden z nejzákladnějších nástrojů pro určení, v jaké době a za jakých podmínekou určité geny exprimovány v živých tkáních.

Western blotting

Western blot je technika, kterou lze detekovat specifické proteiny ze směsi proteinů. Western bloty lze použít ke stanovení velikosti izolovaných proteinů a také ke kvantifikaci jejich exprese. Při western blottingu se proteiny nejprve oddělí podle velikosti v tenkém gelu vloženém mezi dvě skleněné desky v technice známé jako SDS-PAGE . Proteiny v geluou pak přeneseny na polyvinylidenfluorid (PVDF), nitrocelulózu, nylon nebo jinou podpůrnou membránu. Tato membrána může být poté sondována roztoky protilátek . Protilátky, které se specificky vážou na sledovaný protein, pak mohou být vizualizovány různými technikami, včetně barevných produktů, chemiluminiscence nebo autoradiografie . Častoou protilátky značeny enzymy. Když je chemiluminiscenční substrát vystaven působení enzymu, umožňuje detekci. Použití technik western blotting umožňuje nejen detekci, ale také kvantitativní analýzu. Analogické metody jako western blotting mohou být použity k přímému barvení specifických proteinů v živých buňkách nebo řezech tkání .

Eastern blotting

K detekci posttranslačních modifikací proteinů se používá technika východního přenosu . Proteiny blotované na PVDF nebo nitrocelulózovou membránuou testovány na modifikace pomocí specifických substrátů.

Microarrays

Tiskne se DNA microarray
Hybridizace cíle se sondou

DNA microarray je soubor bodů připojených k pevné podložce, jako je mikroskopické sklíčko, kde každá skvrna obsahuje jeden nebo více jednovláknových oligonukleotidových fragmentů DNA. Pole umožňují umístit velké množství velmi malých skvrn (průměr 100 mikrometrů) na jedno sklíčko. Každá skvrna má molekulu fragmentu DNA, která je komplementární k jedné sekvenci DNA . Varianta této techniky umožňuje kvalifikaci genové exprese organismu v určité fázi vývoje ( profilování exprese ). Při této technice je RNA v tkáni izolována a konvertována na značenou komplementární DNA (cDNA). Tato cDNA se poté hybridizuje s fragmenty na čipu a lze provést vizualizaci hybridizace. Protože lze vytvořit více čipů s přesně stejnou polohou fragmentů,ou zvláště užitečné pro srovnání genové exprese dvou různých tkání, jako je zdravá a rakovinná tkáň. Také lze měřit, jaké genyou exprimovány a jak se tato exprese mění s časem nebo s jinými faktory. Existuje mnoho různých způsobů, jak vyrobit mikročipy; nejběžnějšíou křemíkové čipy, mikroskopická sklíčka se skvrnami o průměru ~100 mikrometrů, zakázková pole a pole s většími skvrnami na porézních membránách (makropole). Na daném poli může být od 100 po více než 10 000. Pole lze také vytvořit s jinými molekulami než DNA.

Alelicky specifický oligonukleotid

Alelicky specifický oligonukleotid (ASO) je technika, která umožňuje detekci mutací jedné báze bez nutnosti PCR nebo gelové elektroforézy. Krátké (20–25 nukleotidů dlouhé) značené sondyou vystaveny nefragmentované cílové DNA, hybridizace probíhá s vysokou specificitou díky krátké délce sond a dokonce i jediná změna báze brání hybridizaci. Cílová DNA je poté promyta a značené sondy, které nehybridizovaly,ou odstraněny. Cílová DNA je poté analyzována na přítomnost sondy pomocí radioaktivity nebo fluorescence. V tomto experimentu, stejně jako ve většině technik molekulární biologie, musí být použita kontrola, aby bylo zajištěno úspěšné experimentování.

V molekulární biologii se postupy a technologie neustále vyvíjejí a starší technologie se opouštějí. Například před příchodem DNA gelové elektroforézy ( agaróza nebo polyakrylamid ) byla velikost molekul DNA typicky určována rychlostí sedimentace v sacharózových gradientech, což je pomalá a pracně náročná technika vyžadující drahé vybavení; před sacharózovými gradienty byla použita viskozimetrie . Kromě jejich historického zájmu se často vyplatí vědět o starší technologii, protože občas je užitečné vyřešit jiný nový problém, pro který je novější technika nevhodná.

Viz také

Reference

Další čtení

externí odkazy