Biologia molecular -Molecular biology

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Biologia molecular / m ə l ɛ k j ʊ l ər / é o ramo da biologia que busca entender a base molecular da atividade biológica dentro e entre células, incluindo síntese molecular, modificação, mecanismos e interações. O estudo da estrutura química e física das macromoléculas biológicas é conhecido como biologia molecular.

A biologia molecular foi descrita pela primeira vez como uma abordagem focada nos fundamentos dos fenômenos biológicos - descobrindo as estruturas das moléculas biológicas, bem como suas interações, e como essas interações explicam as observações da biologia clássica.

Em 1945, o termo biologia molecular foi usado pelo físico William Astbury. O desenvolvimento no campo da biologia molecular aconteceu muito tardiamente ao se entender que o sistema complexo ou abordagem vantajosa seria feita de forma simples de entender, utilizando bactérias e bacteriófagos este organismo fornece informações sobre processos biológicos básicos com mais facilidade do que a célula animal. Em 1953 então dois jovens chamados Francis Crick e James Watson trabalhando na unidade do Medical Research Council, no laboratório Cavendish, Cambridge (agora o MRC Laboratory of Molecular Biology ), fizeram um modelo de dupla hélice de DNA que mudou todo o cenário de pesquisa que eles propuseram o DNA estrutura baseada em pesquisas anteriores feitas por Rosalind Franklin e Maurice Wilkins, em seguida, a pesquisa levou à descoberta de material de DNA em outros microrganismos, plantas e animais.

A biologia molecular não é simplesmente o estudo de moléculas biológicas e suas interações; ao contrário, é também uma coleção de técnicas desenvolvidas desde a gênese do campo que permitiram aos cientistas aprender sobre os processos moleculares. Uma técnica notável que revolucionou o campo é a reação em cadeia da polimerase (PCR), que foi desenvolvida em 1983. PCR é uma reação que amplifica pequenas quantidades de DNA e é usada em muitas aplicações em disciplinas científicas, como será discutido mais adiante .

O dogma central da biologia molecular descreve o processo no qual o DNA é transcrito em RNA, que é então traduzido em proteína.

A biologia molecular também desempenha um papel crítico na compreensão de estruturas, funções e controles internos dentro de células individuais, os quais podem ser usados ​​para direcionar com eficiência novos medicamentos, diagnosticar doenças e entender melhor a fisiologia celular. Algumas pesquisas clínicas e terapias médicas decorrentes da biologia molecular são cobertas pela terapia genética, enquanto o uso da biologia molecular ou biologia celular molecular na medicina é agora referido como medicina molecular .

História da biologia molecular

A biologia molecular situa-se na intersecção da bioquímica e da genética; à medida que essas disciplinas científicas surgiram e evoluíram no século 20, ficou claro que ambas procuravam determinar os mecanismos moleculares subjacentes às funções celulares vitais. Os avanços na biologia molecular estão intimamente relacionados ao desenvolvimento de novas tecnologias e sua otimização. A biologia molecular foi elucidada pelo trabalho de muitos cientistas e, portanto, a história do campo depende da compreensão desses cientistas e de seus experimentos.

Tudo começa com o fenômeno de transformação nas bactérias, em 1928, Frederick Griffith, observou um fenômeno de transformação de uma bactéria para outra [agora conhecido como transformação genética]. Naquela época, ele não conseguia explicar o fenômeno da transformação. Mais tarde, em 1944, três cientistas Oswald Avery, Colin Macleod e Maclyn McCarty, demonstraram todo o fenômeno de transformação nas bactérias. Depois, dois anos em 1930, a biologia molecular foi estabelecida como um ramo oficial da ciência. Mas o termo “Biologia Molecular” só foi cunhado em 1938 e isso foi feito pelo cientista Warren Weaver, que trabalhava como diretor de Ciências Naturais da Fundação Rockefeller.

A partir do experimento seguinte, concluiu-se que o DNA é o material genético básico que causou as alterações genéticas. A composição básica do DNA era conhecida por conter quatro bases conhecidas como – Adenina, Guanina, Timina e Citosina. Assim, com base na composição química e na cristalografia de raios X, feita por Maurice Wilkins e Rosalind Franklin, a estrutura do DNA foi proposta por James Watson e Francis Crick. Mas, antes que Watson e Crick propusessem a estrutura do DNA, em 1950 o cientista austríaco Erwin Chargaff, propôs a teoria/regra [hoje conhecida como- regra de Chargaff], que afirmava que o número de Adenina e Timina e Guanina e Citosina são iguais proporção.

A regra de Chargaff

"A regra de Chargaff afirmava que o DNA de qualquer espécie de qualquer organismo deveria ter uma proporção estequiométrica de 1:1 de purinas e pirimidinas (ou seja, A+G=T+C) e, mais especificamente, que a quantidade de guanina deveria ser igual a citosina e a quantidade de adenina deve ser igual à timina . Esse padrão é encontrado em ambas as fitas do DNA".

O campo da genética surgiu como uma tentativa de entender os mecanismos moleculares da herança genética e a estrutura de um gene . Gregor Mendel foi pioneiro neste trabalho em 1866, quando escreveu pela primeira vez as leis da herança genética com base em seus estudos de cruzamentos em plantas de ervilha. Uma dessas leis da herança genética é a lei da segregação, que afirma que indivíduos diplóides com dois alelos para um determinado gene passarão um desses alelos para seus descendentes. Por causa de seu trabalho crítico, o estudo da herança genética é comumente referido como genética mendeliana .

Um marco importante na biologia molecular foi a descoberta da estrutura do DNA. Este trabalho começou em 1869 por Friedrich Miescher, um bioquímico suíço que primeiro propôs uma estrutura chamada nucleína, que agora sabemos ser ácido desoxirribonucleico, ou DNA. Ele descobriu essa substância única estudando os componentes de bandagens cheias de pus e observando as propriedades únicas das "substâncias contendo fósforo". Outro contribuinte notável para o modelo de DNA foi Phoebus Levene, que propôs o "modelo polinucleotídico" de DNA em 1919 como resultado de seus experimentos bioquímicos em leveduras. Em 1950, Erwin Chargaff expandiu o trabalho de Levene e elucidou algumas propriedades críticas dos ácidos nucleicos: primeiro, a sequência dos ácidos nucleicos varia entre as espécies. Em segundo lugar, a concentração total de purinas (adenina e guanina) é sempre igual à concentração total de pirimidinas (cisteína e timina). Isso agora é conhecido como regra de Chargaff. Em 1953, James Watson e Francis Crick publicaram a estrutura helicoidal dupla do DNA, usando o trabalho de cristalografia de raios X feito por Rosalind Franklin e Maurice Wilkins . Watson e Crick descreveram a estrutura do DNA e conjecturaram sobre as implicações dessa estrutura única para possíveis mecanismos de replicação do DNA.

JD Watson e FHC Crick receberam o prêmio Nobel em 1962, juntamente com Maurice Wilkens, por propor um modelo da estrutura do DNA.

Com o passar do tempo, em 1964 KA Marcker e Frederick Sanger descobriram um peculiar amioacil-tRNA em E.coli, chamado N-formil-metionil-tRNA e explicaram que esta molécula desempenha um papel no mecanismo especial de alongamento da cadeia. Ele recebeu o segundo prêmio Nobel pela descoberta da sequência completa de 5.400 nucleotídeos de DNA de fita simples de bacteriófagos F´174.

Em 1961, foi demonstrado que quando um gene codifica uma proteína, três bases sequenciais do DNA de um gene especificam cada aminoácido sucessivo da proteína. Assim, o código genético é um código de tripleto, onde cada tripleto (chamado de códon) especifica um determinado aminoácido. Além disso, foi demonstrado que os códons não se sobrepõem na sequência de DNA que codifica uma proteína e que cada sequência é lida a partir de um ponto de partida fixo.

Durante 1962-1964, através do uso de mutantes letais condicionais de um vírus bacteriano, avanços fundamentais foram feitos em nossa compreensão das funções e interações das proteínas empregadas na maquinaria de replicação do DNA, reparo do DNA, recombinação do DNA e na montagem. de estruturas moleculares.

Representação esquemática da estrutura de DNA de Watson e Crick
Descrição do ângulo na estrutura do DNA

O experimento de F. Griffith

Representação esquemática do experimento

Em 1928, Fredrick Griffith, encontrou uma propriedade de virulência na bactéria pneumococo, que estava matando ratos de laboratório. De acordo com Mendel, predominante na época, a transferência de genes poderia ocorrer apenas de células-mãe para células-filhas. Griffith avançou outra teoria, afirmando que a transferência de genes que ocorre em membros da mesma geração é conhecida como transferência horizontal de genes (HGT). Este fenômeno é agora referido como transformação genética.

Griffith abordou a bactéria Streptococcus pneumoniae, que tinha duas cepas diferentes, uma virulenta e lisa e outra avirulenta e áspera. A cepa lisa tinha aparência brilhante devido à presença de um tipo de polissacarídeo específico – um polímero de glicose e cápsula de ácido glicurônico. Devido a essa camada de polissacarídeos de bactérias, o sistema imunológico de um hospedeiro não consegue reconhecer as bactérias e mata o hospedeiro. A outra cepa, avirulenta e áspera, não possui essa cápsula polissacarídica e tem uma aparência opaca e áspera.

A presença ou ausência de cápsula na cepa, é sabidamente determinada geneticamente. As deformações lisas e ásperas ocorrem em vários tipos diferentes, como SI, S-II, S-III, etc. e RI, R-II, R-III, etc. respectivamente. Todos esses subtipos de bactérias S e R diferem entre si no tipo de antígeno que produzem.

Experiência Hershey e Chase

Experiência Hershey e Chase

A confirmação de que o DNA é o material genético que é a causa da infecção veio do experimento de Hershey e Chase. Eles usaram E. coli e bacteriófago para o experimento. Este experimento também é conhecido como experimento do liquidificador, pois o liquidificador de cozinha foi usado como uma peça importante do aparelho. Alfred Hershey e Martha Chase demonstraram que o DNA injetado por uma partícula de fago em uma bactéria contém todas as informações necessárias para sintetizar as partículas de fago da progênie. Eles usaram a radioatividade para marcar o revestimento proteico do bacteriófago com enxofre radioativo e DNA com fósforo radioativo, em dois tubos de ensaio diferentes, respectivamente. Após misturar bacteriófago e E.coli no tubo de ensaio, inicia-se o período de incubação no qual o fago transforma o material genético nas células de E.coli . Em seguida, a mistura é misturada ou agitada, o que separa o fago das células de E. coli . Toda a mistura é centrifugada e o sedimento que contém células de E. coli foi verificado e o sobrenadante foi descartado. As células de E. coli apresentaram fósforo radioativo, o que indicava que o material transformado era DNA e não o revestimento proteico.

O DNA transformado fica ligado ao DNA de E.coli e a radioatividade só é vista no DNA do bacteriófago. Este DNA mutante pode ser passado para a próxima geração e a teoria da Transdução passou a existir. A transdução é um processo no qual o DNA bacteriano carrega o fragmento de bacteriófagos e o passa para a próxima geração. Este também é um tipo de transferência horizontal de genes.

Biologia Molecular Moderna

À medida que nos aproximamos de meados dos anos 20, a biologia molecular está entrando em uma era de ouro definida pelo desenvolvimento técnico vertical e horizontal. Verticalmente, novas tecnologias estão permitindo o monitoramento em tempo real de processos biológicos em nível atômico. Os biólogos moleculares hoje têm acesso a dados de sequenciamento cada vez mais acessíveis em profundidades cada vez maiores, facilitando o desenvolvimento de novos métodos de manipulação genética em novos organismos não-modelo. Da mesma forma, os biólogos moleculares sintéticos conduzirão a produção industrial de pequenas e macromoléculas através da introdução de vias metabólicas exógenas em várias linhagens celulares procarióticas e eucarióticas.

Horizontalmente, o sequenciamento de dados está se tornando mais acessível e utilizado em diversos campos científicos. Isso impulsionará o desenvolvimento de indústrias em nações em desenvolvimento e aumentará a acessibilidade a pesquisadores individuais. Da mesma forma, os experimentos de edição de genes CRISPR-Cas9 agora podem ser concebidos e implementados por indivíduos por menos de US$ 10.000 em novos organismos, o que impulsionará o desenvolvimento de aplicações industriais e médicas

Relação com outras ciências biológicas

Relação esquemática entre bioquímica, genética e biologia molecular

A lista a seguir descreve um ponto de vista sobre as relações interdisciplinares entre a biologia molecular e outros campos relacionados.

Enquanto os pesquisadores praticam técnicas específicas da biologia molecular, é comum combiná-las com métodos da genética e da bioquímica . Grande parte da biologia molecular é quantitativa e, recentemente, uma quantidade significativa de trabalho foi feita usando técnicas de ciência da computação, como bioinformática e biologia computacional . A genética molecular, o estudo da estrutura e função dos genes, está entre os subcampos mais proeminentes da biologia molecular desde o início dos anos 2000. Outros ramos da biologia são informados pela biologia molecular, estudando diretamente as interações de moléculas em seu próprio direito, como em biologia celular e biologia do desenvolvimento, ou indiretamente, onde técnicas moleculares são usadas para inferir atributos históricos de populações ou espécies, como em campos da biologia evolutiva, como genética de populações e filogenética . Há também uma longa tradição de estudar biomoléculas "do zero", ou molecularmente, em biofísica .

Técnicas de Biologia Molecular

Animação de DNA

Clonagem molecular

Imagem de transdução

A clonagem molecular é usada para isolar e depois transferir uma sequência de DNA de interesse para um vetor plasmídico. Esta tecnologia de DNA recombinante foi desenvolvida pela primeira vez na década de 1960. Nesta técnica, uma sequência de DNA que codifica uma proteína de interesse é clonada usando reação em cadeia da polimerase (PCR) e/ou enzimas de restrição, em um plasmídeo ( vetor de expressão ). O vetor de plasmídeo geralmente tem pelo menos 3 características distintas: uma origem de replicação, um sítio de clonagem múltipla (MCS) e um marcador seletivo (geralmente resistência a antibióticos ). Além disso, a montante do MCS estão as regiões promotoras e o sítio de início da transcrição, que regulam a expressão do gene clonado.

Este plasmídeo pode ser inserido em células bacterianas ou animais. A introdução de DNA em células bacterianas pode ser feita por transformação via captação de DNA nu, conjugação via contato célula-célula ou por transdução via vetor viral. A introdução de DNA em células eucarióticas, como células animais, por meios físicos ou químicos é chamada de transfecção . Várias técnicas de transfecção diferentes estão disponíveis, como transfecção de fosfato de cálcio, eletroporação, microinjeção e transfecção de lipossomas . O plasmídeo pode ser integrado ao genoma, resultando em uma transfecção estável, ou pode permanecer independente do genoma e expresso temporariamente, chamado de transfecção transitória.

O DNA que codifica uma proteína de interesse agora está dentro de uma célula, e a proteína agora pode ser expressa. Uma variedade de sistemas, como promotores indutíveis e fatores de sinalização celular específicos, estão disponíveis para ajudar a expressar a proteína de interesse em altos níveis. Grandes quantidades de uma proteína podem então ser extraídas da célula bacteriana ou eucariótica. A proteína pode ser testada quanto à atividade enzimática sob uma variedade de situações, a proteína pode ser cristalizada para que sua estrutura terciária possa ser estudada, ou, na indústria farmacêutica, a atividade de novos fármacos contra a proteína pode ser estudada.

Reação em cadeia da polimerase

A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica extremamente versátil para copiar DNA. Em resumo, a PCR permite que uma sequência de DNA específica seja copiada ou modificada de maneiras predeterminadas. A reação é extremamente poderosa e em condições perfeitas poderia amplificar uma molécula de DNA para se tornar 1,07 bilhão de moléculas em menos de duas horas. A PCR tem muitas aplicações, incluindo o estudo da expressão gênica, a detecção de microrganismos patogênicos, a detecção de mutações genéticas e a introdução de mutações no DNA. A técnica de PCR pode ser usada para introduzir sítios de enzimas de restrição nas extremidades de moléculas de DNA, ou para mutar bases particulares de DNA, este último é um método conhecido como mutagênese sítio-dirigida . A PCR também pode ser usada para determinar se um fragmento de DNA específico é encontrado em uma biblioteca de cDNA . A PCR tem muitas variações, como a PCR de transcrição reversa ( RT-PCR ) para amplificação de RNA e, mais recentemente, a PCR quantitativa que permite a medição quantitativa de moléculas de DNA ou RNA.

Gel de agarose a dois por cento em tampão de borato moldado em uma bandeja de gel.

Eletroforese em gel

SDS-PAGE

A eletroforese em gel é uma técnica que separa as moléculas pelo seu tamanho usando um gel de agarose ou poliacrilamida. Esta técnica é uma das principais ferramentas da biologia molecular. O princípio básico é que os fragmentos de DNA podem ser separados aplicando uma corrente elétrica através do gel - como o esqueleto do DNA contém grupos fosfato carregados negativamente, o DNA migrará através do gel de agarose em direção à extremidade positiva da corrente. As proteínas também podem ser separadas com base no tamanho usando um gel SDS-PAGE, ou com base no tamanho e sua carga elétrica usando o que é conhecido como eletroforese em gel 2D .

Proteínas coradas em gel PAGE usando corante azul Coomassie.

O ensaio de Bradford

O Bradford Assay é uma técnica de biologia molecular que permite a quantificação rápida e precisa de moléculas de proteína utilizando as propriedades únicas de um corante chamado Coomassie Brilliant Blue G-250. Coomassie Blue sofre uma mudança de cor visível de marrom avermelhado para azul brilhante após a ligação à proteína. Em seu estado catiônico instável, o Coomassie Blue tem um comprimento de onda de fundo de 465 nm e emite uma cor marrom-avermelhada. Quando o Coomassie Blue se liga à proteína em uma solução ácida, o comprimento de onda de fundo muda para 595 nm e o corante emite uma cor azul brilhante. As proteínas no ensaio se ligam ao azul de Coomassie em cerca de 2 minutos, e o complexo proteína-corante é estável por cerca de uma hora, embora seja recomendado que as leituras de absorbância sejam feitas dentro de 5 a 20 minutos após o início da reação. A concentração de proteína no ensaio de Bradford pode então ser medida usando um espectrofotômetro de luz visível e, portanto, não requer equipamento extensivo.

Este método foi desenvolvido em 1975 por Marion M. Bradford e permitiu uma quantificação de proteínas significativamente mais rápida e mais precisa em comparação com métodos anteriores: o procedimento de Lowry e o ensaio de biureto. Ao contrário dos métodos anteriores, o ensaio de Bradford não é suscetível à interferência de várias moléculas não proteicas, incluindo etanol, cloreto de sódio e cloreto de magnésio. No entanto, é suscetível à influência de agentes tamponantes alcalinos fortes, como o dodecil sulfato de sódio (SDS).

Blotting e sondagem de macromoléculas

Os termos Northern, Western e Eastern blotting são derivados do que inicialmente era uma piada de biologia molecular que brincava com o termo Southern blotting, após a técnica descrita por Edwin Southern para a hibridização de DNA blotted. Patricia Thomas, desenvolvedora do RNA blot que então ficou conhecido como Northern blot, na verdade não usou o termo.

Southern blotting

Nomeado em homenagem ao seu inventor, o biólogo Edwin Southern, o Southern blot é um método para sondar a presença de uma sequência de DNA específica dentro de uma amostra de DNA. Amostras de DNA antes ou depois da digestão com enzimas de restrição (endonucleases de restrição) são separadas por eletroforese em gel e então transferidas para uma membrana por blotting via ação capilar . A membrana é então exposta a uma sonda de DNA marcada que possui uma sequência de bases complementar à sequência do DNA de interesse. Southern blotting é menos comumente usado em ciência de laboratório devido à capacidade de outras técnicas, como PCR, para detectar sequências de DNA específicas de amostras de DNA. Esses blots ainda são usados ​​para algumas aplicações, no entanto, como medir o número de cópias do transgene em camundongos transgênicos ou na engenharia de linhagens de células-tronco embrionárias de nocaute de genes .

Northern blotting

Diagrama de Northern Blot

O Northern blot é usado para estudar a presença de moléculas específicas de RNA como comparação relativa entre um conjunto de diferentes amostras de RNA. É essencialmente uma combinação de eletroforese em gel de RNA desnaturante e um blot . Nesse processo, o RNA é separado com base no tamanho e então é transferido para uma membrana que é então sondada com um complemento marcado de uma sequência de interesse. Os resultados podem ser visualizados de várias maneiras, dependendo do rótulo utilizado; entretanto, a maioria resulta na revelação de bandas que representam os tamanhos do RNA detectado na amostra. A intensidade dessas bandas está relacionada com a quantidade de RNA alvo nas amostras analisadas. O procedimento é comumente usado para estudar quando e quanto a expressão gênica está ocorrendo medindo quanto desse RNA está presente em diferentes amostras, assumindo que não ocorre regulação pós-transcricional e que os níveis de mRNA refletem níveis proporcionais da proteína correspondente sendo produzido. É uma das ferramentas mais básicas para determinar em que momento e sob quais condições certos genes são expressos em tecidos vivos.

Western blotting

Um Western blot é uma técnica pela qual proteínas específicas podem ser detectadas a partir de uma mistura de proteínas. Western blots podem ser usados ​​para determinar o tamanho de proteínas isoladas, bem como para quantificar sua expressão. No Western blotting, as proteínas são primeiro separadas por tamanho, em um gel fino ensanduichado entre duas placas de vidro em uma técnica conhecida como SDS-PAGE . As proteínas no gel são então transferidas para um fluoreto de polivinilideno (PVDF), nitrocelulose, nylon ou outra membrana de suporte. Esta membrana pode então ser sondada com soluções de anticorpos . Os anticorpos que se ligam especificamente à proteína de interesse podem ser visualizados por uma variedade de técnicas, incluindo produtos coloridos, quimioluminescência ou autorradiografia . Muitas vezes, os anticorpos são marcados com enzimas. Quando um substrato quimioluminescente é exposto à enzima, permite a detecção. O uso de técnicas de Western blotting permite não apenas a detecção, mas também a análise quantitativa. Métodos análogos ao Western blotting podem ser usados ​​para corar diretamente proteínas específicas em células vivas ou seções de tecido .

Mancha oriental

A técnica de Eastern blotting é usada para detectar modificações pós-traducionais de proteínas. Proteínas transferidas para a membrana de PVDF ou nitrocelulose são sondadas para modificações usando substratos específicos.

Microarrays

Um microarray de DNA sendo impresso
Hibridação de alvo para sonda

Um microarray de DNA é uma coleção de pontos ligados a um suporte sólido, como uma lâmina de microscópio, onde cada ponto contém um ou mais fragmentos de oligonucleotídeos de DNA de fita simples . As matrizes permitem colocar grandes quantidades de manchas muito pequenas (100 micrômetros de diâmetro) em uma única lâmina. Cada mancha tem uma molécula de fragmento de DNA que é complementar a uma única sequência de DNA . Uma variação desta técnica permite qualificar a expressão gênica de um organismo em um determinado estágio de desenvolvimento ( perfil de expressão ). Nesta técnica, o RNA em um tecido é isolado e convertido em DNA complementar marcado (cDNA). Este cDNA é então hibridizado com os fragmentos na matriz e a visualização da hibridização pode ser feita. Como vários arrays podem ser feitos exatamente com a mesma posição de fragmentos, eles são particularmente úteis para comparar a expressão gênica de dois tecidos diferentes, como um tecido saudável e um canceroso. Além disso, pode-se medir quais genes são expressos e como essa expressão muda com o tempo ou com outros fatores. Existem muitas maneiras diferentes de fabricar microarrays; os mais comuns são chips de silício, lâminas de microscópio com manchas de ~100 micrômetros de diâmetro, matrizes personalizadas e matrizes com manchas maiores em membranas porosas (macroarrays). Pode haver de 100 pontos a mais de 10.000 em uma determinada matriz. As matrizes também podem ser feitas com outras moléculas além do DNA.

Oligonucleotídeo específico de alelo

O oligonucleotídeo alelo-específico (ASO) é uma técnica que permite a detecção de mutações de base única sem a necessidade de PCR ou eletroforese em gel. Curto (20-25 nucleotídeos de comprimento), sondas marcadas são expostas ao DNA alvo não fragmentado, a hibridização ocorre com alta especificidade devido ao curto comprimento das sondas e até mesmo uma única mudança de base dificultará a hibridização. O DNA alvo é então lavado e as sondas marcadas que não hibridizam são removidas. O DNA alvo é então analisado quanto à presença da sonda via radioatividade ou fluorescência. Neste experimento, como na maioria das técnicas de biologia molecular, um controle deve ser usado para garantir o sucesso da experimentação.

Na biologia molecular, procedimentos e tecnologias estão sendo continuamente desenvolvidos e tecnologias mais antigas são abandonadas. Por exemplo, antes do advento da eletroforese em gel de DNA ( agarose ou poliacrilamida ), o tamanho das moléculas de DNA era tipicamente determinado pela velocidade de sedimentação em gradientes de sacarose, uma técnica lenta e trabalhosa que requer instrumentação cara; antes dos gradientes de sacarose, a viscometria foi usada. Além de seu interesse histórico, muitas vezes vale a pena conhecer a tecnologia mais antiga, pois ocasionalmente é útil para resolver outro novo problema para o qual a técnica mais recente é inadequada.

Veja também

Referências

Leitura adicional

links externos